2.2.4 小鼠巨噬细胞吞噬功能试验 通过镜检可发现,对照组中发生吞噬作用的巨噬细胞明显较试验组中的少(图1)。经过统计、计算,试验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数与对照组相比均有明显提高,且差异显著(P<0.05)(表3)。
2.2.5 E玫瑰花环试验 经统计学处理可知,加入猪脾TF的试验组中E玫瑰花环形成数和E玫瑰花环形成率较对照组均有明显提高,差异极显著(P<0.01)(表4)。
2.2.6 猪脾TF对体液免疫效果的影响 由表5可见,免疫前试验组与对照组的猪瘟抗体平均滴度(用以2为底的对数值表示,下同)均为4.45;免疫后21 d,对照组的抗体平均滴度测量值达到5.05,而试验组的抗体平均滴度测量值则达到6.35,免疫后分别上升了0.60和1.90,经显著性检验,两者差异显著(P<0.05)。
3 小结与讨论
将新鲜健康猪脾组织经高速组织捣碎机高速匀浆多次,再经反复冻融、离心、透析、过滤除菌,可制得猪脾TF,此法简便、成本低廉、不需要特殊的器材和设备。此外,由于TF在常温下易失活,因此,相关操作(如离心、透析)应在低温下进行。利用透析法制备的猪脾TF无毒性、无热原、无抗原性,符合兽医的临床用药标准。但是在实际生产中,猪脾脏的来源广泛,很难确保脾脏组织中不含细菌、病毒等微生物,而采用过滤法并不能保证将各类微生物尤其是病毒完全去除,并且过滤法会延长操作时间,不利于实际生产。因此,应进一步探索采取更加简便、有效的方法去除组织中的各类微生物。经试验证明,此次制备的猪脾TF能够显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,增加E玫瑰花环形成数。说明TF能够增强动物的非特异性免疫能力,并能够增强T淋巴细胞的免疫活性。畜禽在接种疫苗后5~7 d才能产生有效的抗体,在这段时间内机体的抗体水平低,抗病能力差,一旦有病原体感染则很容易发病,如果在这段免疫间隙期内使用TF则能有效增强动物的抗病能力。此外,初生动物的免疫功能尚未健全,如果在初生动物中使用成年动物的TF,则能够增强初生动物的抗病能力,如崔恒宓等[11]通过试验证明,初生仔猪注射成年猪TF可将成年猪的免疫功能尽早转移给仔猪,从而促进仔猪的免疫功能发育。有报道指出,TF能够增强B淋巴细胞的活性,从而增加机体的体液免疫抗体滴度[12]。本试验结果也表明,在进行猪瘟免疫时配合使用TF,可改善猪的免疫机能,显著提高其抗体滴度,从而有效提高猪瘟疫苗的免疫效果,值得在生猪免疫中推广使用。但是本试验中猪脾TF以1 mL/只的剂量进行使用是否最佳,以及母源抗体水平高低对猪脾TF作用效果有无影响尚需进一步研究证实。通过检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力和E玫瑰花环形成试验,虽能在一定程度上测定猪脾TF的免疫活性,但是这些试验结果的判定都存在一定的主观性,且试验重复性受到不同批次试验动物免疫状态差别的影响,因此,建立适宜的动物模型和简便有效的活性测定方法,将是今后研究的重点。
参考文献:
[1] LAWRENCE H S.The transfer in humans of delayed skin sensitivity to streptococcial M substances and to tuberculin with disrupted leucocytes [J].J Clin Invest,1955,34(2):219-230.
[2] 张述智,辛本萍,朱高照.动物转移因子的研究进展[J].山东畜牧兽医,2008(5):43-44.
[3] WILLIAMS M E, KAUFFMAN C L. Transfer factor: a murine model[J].Infect Immun,1980,27(1):187-191.
[4] PETERSEN E A,GREENBERG L E,MANZARA T,et al. Murine transfer factor. I. Description of the model and evidence for specificity[J].J Immunol,1981,126(6):2480-2484.
[5] KIRKPATRICK C H, ROZZO S J, MASCALI J J, et al. Murine transfer factor.Ⅱ.Transfer of delayed hypersensitivity to synthetic antigens [J].J Immunol,1985,134(3):1723-1727.
[6] 蔡琳昌.猪脾转移因子的制备及质量控制[A].第四届全国转移因子学术讨论会论文集[C].北京:中国科学技术出版社,1990.158-161.
[7] 藏广田.应用TF对人工感染鸡新城疫和鸡传染性喉气管炎治疗试验初报[J].河南畜牧兽医,1981(1):12-13.
[8] 李学良,刘润珍,李炳云,等.动物TF的研制与临床应用[J].中国兽医科技,1995(10):22-23.
[9] 郭宝福,郭 鑫,高 爽.TF对奶牛隐性乳房炎的疗效观察[J].中国兽医杂志,1993(5):21-22.
[10] 中国生物制品标准化委员会.中国生物制品规程[M].北京:化学工业出版社,2000.
[11] 崔恒宓,金韶华,毛九德,等.猪脾转移因子的部分生化和免疫性及其应用[J].畜牧兽医学报,1994,25(4):317-322.
[12] 乔彦良.动物转移因子研究与在畜禽疫病防治中的应用[J].中国禽业导刊,2002,19(23):45-47. |